Trichinella spiralis (Giun xoắn) Ab miễn dịch bán tự động - Bộ y tế 2018

I. MỤC ĐÍCH VÀ NGUYÊN LÝ

1. Mục đích

• Phát hiện kháng thể IgG kháng với Trichinella spiralis có trong mẫu huyết thanh.

2. Nguyên lý

• Phát hiện kháng thể IgG kháng với Trichinella spiralis có trong mẫu huyết thanh bằng kỹ thuật miễn dịch gắn men (ELISA).

II. CHUẨN BỊ

1.Người thực hiện

•  Người thực hiện: Kỹ thuật viên/Cử nhân, nhân viên đã được đào tạo và có chứng chỉ ho c chứng nhận v chuyên ngành Vi sinh/ Ký sinh trùng.
•  Người nhận định và phê duyệt kết quả: Cán bộ có trình độ đại học ho c sau đại học v chuyên ngành Vi sinh / Ký sinh trùng, có chứng chỉ ho c chứng nhận v chuyên ngành Vi sinh/ Ký sinh trùng

2.Phương tiện, hóa chất

• Phương tiện, hóa chất như ví dụ dưới đây ho c tương đương.

2.1. Trang thiết bị

•  Máy đọc ELISA.
•  Máy ly tâm
•  T lạnh 2oC -8oC
•  Micropipette và Đầu côn10 μl, 200 μl, 1000 μl.
•  Giá đựng ống máu
•  Ống nghiệm.
•  Ống đong chia vạch.
•  Giấy thấm.

2.2. Dụng cụ, hóa chất và vật tư tiêu hao (bao gồm nội kiểm, ngoại kiểm)

* Ghi chú:

•  Chi phí ngoại kiểm cho quy trình kỹ thuật được tính cụ thể theo Chương trình ngoại kiểm (EQAS) là 1/200 tổng chi phí dụng cụ, hóa chất, vật tư tiêu hao (với số lần ngoại kiểm trung bình 2 lần/1 năm).

3.Bệnh phẩm

• Huyết thanh

4.Phiếu xét nghiệm

• Điền đầy đủ thông tin theo mẫu phiếu yêu cầu

III. Các bước tiến hành

1. Lấy bệnh phẩm

• Theo đúng quy định c a chuyên ngành Vi sinh (Xem Phụ lục).

2. Tiến hành kỹ thuật

Bộ sinh phẩm chẩn đoán c a Scimedx (USA)

•  Lấy bộ kít ra khỏi t lạnh, lấy đ số giếng cần làm.
•  Nhỏ chứng dương, chứng âm và mẫu huyết thanh đã pha loãng 1/64 vào mỗi giếng.
•  nhiệt độ 15-25°C trong 10 phút
•  Rửa với dung dịch rửa đã pha loãng, lắc sạch nước.
•  Thêm Conjugate vào mỗi giếng, nhiệt độ phòng trong 5 phút.
•  Rửa với dung dịch rửa đã pha loãng, lắc sạch nước.
•  Nhỏ TMB vào mỗi giếng nhiệt độ phòng trong 5 phút.
•  Nhỏ Stop Solution.

IV. NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

1. Đọc kết quả

• Cài đ t bước sóng máy đọc là 450nm/650nm-620nm.
• Đọc kết quả theo hướng dẫn c a bộ kít.

2. Kiểm tra chất lượng

•  Kiểm tra chất lượng cho phép đánh giá sự ổn định c a bộ kít. Bộ kít không được sử dụng nếu bất kỳ chứng dương ho c chứng âm vượt ra khỏi ngưỡng quy định.

V. NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ

1. Sai sót

Có thể xảy ra hiện tượng âm tính giả ho c dương tính giả, thông thường do:

• Thực hiện sai các bước trong quy trình hướng dẫn.
• Chứng âm và những mẫu bệnh phẩm âm tính bị nhiễm chéo b i huyết thanh/ huyết tương có nồng độ kháng thể cao.
• Dung dịch cơ chất bị nhiễm b i các tác nhân oxid hoá (thuốc tẩy, ion kim loại v.v...)
• Dung dịch dừng phản ứng bị nhiễm bẩn.

2. Xử trí

•  Tuân th đúng các bước qui trình hướng dẫn c a nhà sản xuất và hướng dẫn v độ ổn định hóa chất xét nghiệm trong bộ sinh phẩm sử dụng.
•  Kiểm tra và vệ sinh máy rửa thường xuyên trước và sau khi làm xét nghiệm.